But :

Mise en évidence des bacilles Acido-Alcoolo Résistants (BAAR) : Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium leprae, autres mycobactéries. Cette coloration permet aussi de mettre en évidence des bactéries comme Nocardia ou des micro-organismes comme Cyclospora cayetanensis

Matériel :
lames, coton, alcool 95 °, pince en bois, pince en métal, porte lames, colorants, masque et lunettes.

Préalable :
Afin d’éviter toute contamination, il est conseillé d’observer toutes les règles d’hygiène et de sécurité en vigueur. Procéder à un prélèvement de crachat puis l'étaler sur lame.
Filtrer les colorants et l’eau de lavage et de dilution

Mode opératoire :

• Poser la lame sur son support, la recouvrir de fuschine phéniquée
• Prendre un coton imbibé d’alcool avec la pince en métal, l’enflammer et chauffer la lame par le dessous jusqu’à émission de vapeurs par le colorant mais sans aller jusqu’à l’ébullition.
• Recommencer encore deux fois l’opération , le tout en une dizaine de minutes. Remettre de la fuschine si besoin, la lame doit rester couverte.
• Laver à l’eau

Coloration de Ziehl (Sindou 1999)

• Recouvrir d’acide sulfurique dilué au quart dans l’eau pendant 2 min, la coloration devient jaunâtre.

• Laver à l’eau

• Recouvrir d’alcool à 95 ° pendant 3 min, la coloration devient rose pale

• Laver à l’eau

• Recouvrir de bleu de méthylène phéniqué pendant 30 secondes

• Laver à l’eau, essuyer la face inférieure et laisser sécher.

Résultat :
Observer à l’objectif X100 pendant au moins 10 min. Les BAAR apparaissent en rouge sur un fond bleu

Contrôle de qualité :

Il existe un moyen très simple de vérifier la qualité de votre coloration. Il suffit de mélanger un peu de vaccin BCG (même périmé !) à votre propre crachat, puis de l'étaler comme les crachats à tester et de colorer toutes vos lames en parallèle.
La lame contenant le BCG est remplie de petits bacilles rouges AAR.

Variante appliquée à la recherche du bacille de Hansen :
Le BH se décolore plus facilement que le BK et apparentés, on laissera donc la lame en contact de l’acide sulfurique pendant 1 minute et de l’alcool pendant 45 secondes.

Préparation des réactifs :

FUCHSINE PHÉNIQUÉE : (tenir à l'abri de la lumière et filtrer avant usage).

• H2O distillée 2.000 ml
• Fuchsine basique 20 g
• Phénol aqueux 100 ml
• Alcool à 95 °C 200 ml

BLEU DE MÉTHYLÈNE : (tenir à l'abri de la lumière et filtrer avant usage).

• H2O distillée 2.000 ml
• Bleu de méthylène médicinal 40 g
• Phénol aqueux 40 ml
• Alcool à 95 °C 200 ml

ACIDE :

• H2O distillée 1.500 ml
• Acide sulfurique 500 ml

ALCOOL :

• Alcool à 100° (éthanol absolu)