Principe :
Le sang est dilué à l’aide du bleu acétique, un diluant leucocytaire qui lyse les globules rouges et laisse intacts les globules blancs. On compte alors les leucocytes, au microscope, sur une cellule de comptage et on calcule le nombre de leucocytes par litre de sang.

Matériel :
Pipette de Potain ou de Thoma pour globules blancs, liquide de dilution, cellule de Malassez ou de Thoma (utiliser de préférence Malassez), lamelles, " chambre " humide, chronomètre.

Mode opératoire :

• Pipeter le sang jusqu'à la graduation 0,5 pour pipette de Thoma, 2 pour pipette de Potain
• Essuyer l’extérieur de la pipette , en faisant bien attention de ne pas absorber le volume sanguin à l’intérieur de la pipette ;
• Compléter à la graduation 101 avec le liquide de dilution. On obtient ainsi une dilution au 1/20 ;
• Bien agiter par retournement pendant 1 minute ;
• Laisser reposer dans la pipette pendant 15 minutes ;
• Rejeter les 2 premières gouttes
• Procéder à la numération des éléments, on obtient ainsi n globules blancs (GB) ;

Calculs :

• Thoma : On compte la cellule : n x 10 x 20 = N GB / mm³
• Malassez : On compte une bande : n x 10 x 20 = N GB / mm³

Calcul dans 1 litre de sang : N x 10⁶ = x 10⁹ GB / l ; Comparer avec les valeurs normales

Réactifs :

Bleu acétique :

• acide acétique glacial 4,0 ml
• eau distillée QSP 200 ml
• bleu de méthylène en solution aqueuse : 10 gouttes

Lors de faibles utilisation, on peut toujours préparer la moitié du liquide. Le bleu acétique se conserve bien, à l'abri de l'air et de la lumière.

Valeurs normales :

• Adultes : 4 à 9 10⁹ / l
• < à 1 an :10 à 20 10⁹ / l