Principe :
La solution de Giemsa est utilisée, entre autre, pour la coloration de protozoaires (Giardia, Trichomonas, Plasmodium)

Matériel :

Lames d'étalement fixées (pas la goutte épaisse) ou très sèches, cuve à coloration, Giemsa, chronomètre.

Mode opératoire :

• Placer les lames dans la cuve, la remplir doucement de Giemsa dilué (solution de travail).
• Laisser colorer pendant une demi-heure à l'abri de la lumière
• Verser de l'eau dans la cuve pour éliminer une partie du colorant ainsi que l'écume formée en surface.
• Vider le reste du liquide et rincer à l'eau. Sécher les lames et observer au microscope à l'objectif 40 ou 100 à immersion dans le cas de plasmodium.
• Dans le cas de frottis pour recherche de plasmodium, les noyaux leucocytaires sont violet foncé, la chromatine du plasmodium est rouge foncé et son cytoplasme bleu pâle.

Solution mère de Giemsa :

• Colorant de Giemsa en poudre 0,75 g
• Méthanol (CH3OH) 65 ml
• Glycérol 65 ml

Préparation :

• Commencer par verser le méthanol dans un flacon contenant des billes de verre (ou des petits galets très propres) puis ajouter la poudre et la laisser doucement se déposer au fond du flacon.
• Agiter ensuite pendant 3 minutes de manière circulaire.
• Ajouter enfin le glycérol et mélanger de la même manière. Remuer ensuite, toujours de cette manière 3 fois par jour, pendant 4 jours consécutifs.
• Filtrer. Noter la date de fabrication.

Une solution mère se conserve trois mois à l'abri de l'air (bien boucher), de la lumière (en flacon opaque) et de l'humidité (au dessus du réfrigérateur).

Solution de travail de Giemsa :

Diluer la solution mère au dixième dans de l'eau. Bien mélanger.